美國孟山都公司自己進(jìn)行的毒理學(xué)動物試驗(yàn)證明，每天對老鼠、兔子、猴子、喂食含少量草甘膦的飼料，“結(jié)果發(fā)現(xiàn)，連續(xù)服用10天左右后，實(shí)驗(yàn)動物體內(nèi)草甘膦殘留分布水平達(dá)到最高值，不再升高。殘留量最高的七部分順序?yàn)槟I臟（最高）、脾（其次）、脂肪、肝、卵巢、心臟與肌肉?！?/p>
哺乳動物喂食轉(zhuǎn)基因成分飼料，發(fā)現(xiàn)活的轉(zhuǎn)基因片段進(jìn)入牛、老鼠、豬、雞、羊的奶、肉、內(nèi)臟、血液，進(jìn)入人類腸胃系統(tǒng)，以至可能“通過胎盤進(jìn)入未出生的胎兒體內(nèi)，或是融入成熟生殖細(xì)胞中，從而改變子孫后代的遺傳特征”
（詳見《轉(zhuǎn)基因危害47：研究證實(shí)轉(zhuǎn)基因在消化系統(tǒng)中存活并四處游動》
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dumi.html）
國外研究發(fā)現(xiàn)喂食轉(zhuǎn)基因成分飼料后，發(fā)現(xiàn)活的轉(zhuǎn)基因片段進(jìn)入牛、老鼠、豬、雞、羊的奶、肉、內(nèi)臟、血液等結(jié)果，與中國科學(xué)院海洋生物技術(shù)研究與開發(fā)中心團(tuán)隊(duì)科學(xué)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)含30%轉(zhuǎn)基因豆粕飼料喂食羅非魚7周以后“在胃內(nèi)容物、腸內(nèi)容物、糞便、心臟、肝臟、胃、腸、卵巢、精巢、腦、鰓絲、脾臟、膽囊、肌肉等不同部位的DNA中都能檢測到外源基因的存在,說明轉(zhuǎn)基因大豆中的外源DNA并不能被羅非魚的消化道完全降解,其DNA片段可能通過消化吸收轉(zhuǎn)移到魚體的各種組織”的結(jié)果一致?。ㄔ斠姾筮吀戒汚、B、C）
益海嘉里集團(tuán)證明他們加工生產(chǎn)“化學(xué)浸出”轉(zhuǎn)基因大豆油以及每年生產(chǎn)的約1200萬噸副產(chǎn)品“轉(zhuǎn)基因豆粕”是經(jīng)過衛(wèi)生部審批“合法轉(zhuǎn)基因食品”的批準(zhǔn)文件，更拿不出任何科學(xué)試驗(yàn)證據(jù)證明他們巨量生產(chǎn)銷售的“轉(zhuǎn)基因豆粕”加工的轉(zhuǎn)基因大豆成分飼料與脫脂轉(zhuǎn)基因蛋白粉等一系列轉(zhuǎn)基因成分食品，對人類健康不造成上述類似惡果。
這一系列事實(shí)構(gòu)成益海嘉里集團(tuán)益海嘉里集團(tuán)金龍魚“以危險方法危害社會罪”的鐵證！
附錄A、陶冉，飼料中轉(zhuǎn)基因成分檢測及對水產(chǎn)動物安全性評價的初步研究，《中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）》 2008年
http://cdmd.cnki.com.cn/Article/CDMD-80068-2008117269.htm
【摘要】：自轉(zhuǎn)基因作物問世以來,轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性問題一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。本文根據(jù)GenBank中登錄的轉(zhuǎn)基因大豆完整外源DNA序列設(shè)計(jì)了幾對引物,對轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)行了巢式PCR檢測。結(jié)果表明,巢式PCR可以擴(kuò)增10-10g/μl濃度的DNA溶液,檢測靈敏度高達(dá)0.01%。該巢式PCR技術(shù)具有高度特異性、靈敏度和很好的重復(fù)性。
用巢式PCR對部分市售的水產(chǎn)飼料和豆制食品進(jìn)行檢測，90.6%的水產(chǎn)飼料和46.5%的食品能檢測出外源基因片段,表明轉(zhuǎn)基因大豆廣泛存在于水產(chǎn)飼料和我們的日常食品中,為食品安全分析和管理提供了方法和依據(jù)。
環(huán)介導(dǎo)的等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)依賴于能夠識別靶序列上6個特異區(qū)域的引物和一種具有鏈置換特性的DNA聚合酶,在等溫條件下可高效、快速、高特異地擴(kuò)增靶序列。
本研究建立了轉(zhuǎn)基因大豆的LAMP擴(kuò)增技術(shù),針對豆制品以及飼料的轉(zhuǎn)基因LAMP檢測技術(shù)正在研究和開發(fā)中。
利用轉(zhuǎn)基因和非轉(zhuǎn)基因豆粕制作的飼料,喂養(yǎng)吉富羅非魚,分別于4周、7周取樣,對其體重和血液指標(biāo)進(jìn)行了檢測。
實(shí)驗(yàn)顯示,投喂轉(zhuǎn)基因飼料7周以后，增重率和血清指標(biāo),轉(zhuǎn)基因組與非轉(zhuǎn)基因飼料組相比沒有顯著差異。全血指標(biāo)中白細(xì)胞數(shù)目、大血小板比率、平均血小板體積和血小板體積分布寬度4項(xiàng)指標(biāo)顯著高于非轉(zhuǎn)基因飼料組,而且差異達(dá)到極顯著水平。
由以上結(jié)果可見,轉(zhuǎn)基因大豆與非轉(zhuǎn)基因大豆相比,對羅非魚的一些生理過程造成了一定的影響,但是并未對其生長造成可見的影響。
分別于投喂1h、4h和8h以后取羅非魚胃內(nèi)容物、腸道內(nèi)容物和糞便,并分別于4周、7周和繼續(xù)饑餓2周后,取羅非魚不同組織，提取DNA，用巢式PCR法檢測轉(zhuǎn)基因大豆中的外源基因在各種組織中的分布，結(jié)果顯示在胃內(nèi)容物、腸內(nèi)容物、糞便、心臟、肝臟、胃、腸、卵巢、精巢、腦、鰓絲、脾臟、膽囊、肌肉等不同部位的DNA中都能檢測到外源基因的存在,說明轉(zhuǎn)基因大豆中的外源DNA并不能被羅非魚的消化道完全降解,其DNA片段可能通過消化吸收轉(zhuǎn)移到魚體的各種組織。
在投喂轉(zhuǎn)基因飼料7周以后以及停止投喂饑餓2周以后分離水體中的微生物,提取其DNA,進(jìn)行轉(zhuǎn)基因檢測。結(jié)果顯示在所分離純化的各種微生物中都沒有檢測到轉(zhuǎn)基因大豆中外源基因35S-EPSPS的存在。
【關(guān)鍵詞】：轉(zhuǎn)基因大豆 檢測 巢式PCR 羅非魚 安全性評價
【學(xué)位授予單位】：中國科學(xué)院研究生院（海洋研究所）
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：S963
【目錄】：
中文摘要 5-6
Abstract6-8 引言 8-9
1 前言 9-27
1.1 全球轉(zhuǎn)基因作物的發(fā)展現(xiàn)狀 9-10
1.2 轉(zhuǎn)基因作物的安全性問題 10-14
1.3 轉(zhuǎn)基因檢測技術(shù)的研究進(jìn)展 14-20
1.4 巢式PCR(nested PCR)和環(huán)介導(dǎo)的等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)簡介20-22
1.5 本研究的必要性、主要內(nèi)容和意義 22-27
2 轉(zhuǎn)基因作物及水產(chǎn)飼料的檢測 27-39
2.1 材料和方法 27-33
2.2 結(jié)果和分析 33-39
3 含有轉(zhuǎn)基因成分的飼料對水產(chǎn)動物安全性評價的初步研究 39-51
3.1 材料和方法 39-40
3.2 結(jié)果和分析 40-51
4 結(jié)論和討論 51-59
4.1 樣品DNA 提取方法 51
4.2 轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品的PCR 檢測 51-53
4.3 轉(zhuǎn)基因大豆的 LAMP 檢測 53-54
4.4 轉(zhuǎn)基因飼料的檢測 54
4.5 轉(zhuǎn)基因飼料對羅非魚生長和生理的影響 54-56
4.6 轉(zhuǎn)基因大豆外源基因在羅非魚體內(nèi)各組織器官的殘留
以及在養(yǎng)殖水體微生物的漂移 56-59
5 實(shí)驗(yàn)總結(jié) 59-60
5.1 創(chuàng)造性成果 59
5.2 存在的問題與建議 59-60
參考文獻(xiàn) 60-68
發(fā)表論文目錄 68-69
致謝 69
附錄B、劉梅、陶冉等，進(jìn)口轉(zhuǎn)基因大豆（Roundup Ready）對吉富羅非魚生長和生理的影響，糧食與飼料工業(yè)，2009(2), pp43-45
http://www.doc88.com/p-74762740168.html
劉梅1, 陶冉1、2, 王雷1, 王寶杰1, 蔣克勇1
( 1. 中國科學(xué)院海洋研究所, 山東青島 266071;
2. 榮成檢驗(yàn)檢疫局, 山東榮成264300)
摘要: 利用進(jìn)口轉(zhuǎn)基因和國產(chǎn)非轉(zhuǎn)基因豆粕制作飼料，喂養(yǎng)吉富羅非魚，分別于飼喂4周、7周以后稱量體重，取其血液，檢測其血液常規(guī)生理生化指標(biāo)，評價轉(zhuǎn)基因豆粕對羅非魚生長和生理的影響。結(jié)果顯示投喂轉(zhuǎn)基因飼料組與非轉(zhuǎn)基因飼料組相比，羅非魚的增重率沒有顯著差異(P > 0. 05)。投喂轉(zhuǎn)基因飼料4周以后， 羅非魚的血液生理指標(biāo)沒有顯著差異。7周以后，轉(zhuǎn)基因組與非轉(zhuǎn)基因飼料組相比，各項(xiàng)血清指標(biāo)沒有顯著差異。全血指標(biāo)中白細(xì)胞數(shù)目(P = 0. 001)、大血小板比率(P =0. 002)、平均血小板體積(P = 0. 000)和血小板體積分布寬度(P = 0. 001) 4項(xiàng)指標(biāo)顯著高于非轉(zhuǎn)基因飼料組, 而且差異達(dá)到極顯著水平(P < 0. 01) 。由以上結(jié)果可見, 進(jìn)口轉(zhuǎn)基因大豆與國產(chǎn)非轉(zhuǎn)基因大豆相比, 對羅非魚的一些生理過程造成了一定的影響, 但是并未對其生長造成可見的影響。
轉(zhuǎn)基因技術(shù)給飼料工業(yè)帶來了很多高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)和特殊用途的作物品種, 隨著轉(zhuǎn)基因作物的迅速發(fā)展與應(yīng)用, 現(xiàn)已有大量的轉(zhuǎn)基因作物作為飼料原料為動物所食用[ 2] , 由此引發(fā)了人們對轉(zhuǎn)基因作物對食物鏈安全乃至對環(huán)境、生態(tài)系統(tǒng)安
全的憂慮[ 3] 。
轉(zhuǎn)基因作物及其加工副產(chǎn)品進(jìn)入食物鏈, 對飼養(yǎng)動物的安全性影響如何, 進(jìn)而可能對人類健康造成何種影響, 這也是廣大消費(fèi)者迫切關(guān)注的問題。
本研究利用尼羅羅非魚( Oreochrom is nilo ticus ) 吉富品系作為養(yǎng)殖動物, 制作含有30%豆粕的羅非魚飼料, 飼喂羅非魚, 評價轉(zhuǎn)基因豆粕對羅非魚生長和生理的影響, 有助于豐富轉(zhuǎn)基因大豆安全性評價方面的工作。
2 結(jié)果
2. 1 轉(zhuǎn)基因豆粕對羅非魚生長的影響
由表1可見, 轉(zhuǎn)基因飼料組與非轉(zhuǎn)基因飼料組相比, 羅非魚的增重率差異不顯著( P > 0. 05)。
2. 2 轉(zhuǎn)基因豆粕對羅非魚血液生理生化指標(biāo)的影響
由表2可知, 4周以后, 兩組羅非魚的全血指標(biāo)和血清指標(biāo)之間差異不顯著(P > 0. 05)。7 周以后, 全血指標(biāo)中白細(xì)胞數(shù)目、大血小板比率、平均血小板體積和血小板體積分布寬度4項(xiàng)指標(biāo)顯著高于非轉(zhuǎn)基因飼料組, 而且差異極顯著水平(P < 0. 01) 。血清指標(biāo)與非轉(zhuǎn)基因飼料組相比差異不顯著(P > 0. 05) 。
3 討論
3. 1 轉(zhuǎn)基因飼料對羅非魚生長和生理的影響
本研究中分別利用含有轉(zhuǎn)基因豆粕和非轉(zhuǎn)基因豆粕的飼料喂養(yǎng)吉富羅非魚， 在投喂4周以后，攝食轉(zhuǎn)基因飼料和非轉(zhuǎn)基因飼料的羅非魚生長與生理狀況沒有顯著的差別。但是在投喂飼料7周以后攝食轉(zhuǎn)基因飼料的羅非魚白細(xì)胞計(jì)數(shù)、大血小板比率、平均血小板體積、血小板體積分布寬度4項(xiàng)血液指標(biāo)明顯高于非轉(zhuǎn)基因飼料組, 其中大血小板比率、平均血小板體積、血小板體積分布寬度3項(xiàng)指標(biāo)的差異達(dá)到極顯著水平。
在各項(xiàng)血液指標(biāo)中，白細(xì)胞計(jì)數(shù)是血液常規(guī)檢測指標(biāo)，對診斷因細(xì)菌感染造成的感染癥或白血病等多種疾病很有幫助。轉(zhuǎn)基因飼料組羅非魚的白細(xì)胞高于非轉(zhuǎn)基因飼料組可能暗示著轉(zhuǎn)基因飼料有可能導(dǎo)致羅非魚肌體產(chǎn)生了輕微的炎癥。
血小板是具有酶和多項(xiàng)生理活性的血細(xì)胞，尤其是在止血和凝血過程中發(fā)揮重要作用，而大血小板是指體積大于一定數(shù)值的血小板，大血小板比率是指大血小板占總血小板的比例，在多種生理或病理過程中都可出現(xiàn)比例的升高。
血小板體積增大說明血小板因消耗多而應(yīng)激性增生,新生的血小板體積一般比較大。大血小板的功能強(qiáng)，更年輕，止血功能更強(qiáng)。轉(zhuǎn)基因組的大血小板比率平均值高于非轉(zhuǎn)基因組，可能暗示著轉(zhuǎn)基因飼料組羅非魚處于某種應(yīng)激狀態(tài)，血小板消耗較多。
平均血小板體積(MPV )是血小板活化的一個重要指標(biāo)。M PV 升高，血小板體積增大，活性增強(qiáng)。與大血小板比率存在一致性。血小板體積分布寬度是以血小板體積變異系數(shù)來表示，是一個反映血小板體積大小的異質(zhì)性參數(shù)。
血小板分布寬度若在正常范圍內(nèi)，提示血小板比容均一；血小板分布寬度增多，提示血小板體積大小不均，個體間相差懸殊；血小板分布寬度減少，提示血小板減少。
骨髓纖維化、原發(fā)性血小板減少性紫癜、血栓性疾病及血栓前狀態(tài)、脾切除、慢粒、巨大血小板綜合癥、鐮刀細(xì)胞性貧血等都有可能引起大血小板比率、平均血小板體積和血小板分布寬度的升高。
雖然引起轉(zhuǎn)基因飼料組羅非魚血小板指標(biāo)升高的具體原因尚不清楚，但是可以肯定的是，攝食轉(zhuǎn)基因飼料的羅非魚體內(nèi)發(fā)生了異常的生理生化反應(yīng)，導(dǎo)致血小板發(fā)生了顯著的變化。
在本研究中，攝食轉(zhuǎn)基因飼料的羅非魚血小板指標(biāo)明顯高于非轉(zhuǎn)基因?qū)φ战M，由此可以推斷轉(zhuǎn)基因飼料雖然不能對羅非魚的生長造成可見的影響，但是卻有可能引起肌體產(chǎn)生了細(xì)微的生理變化，在白細(xì)胞和血小板上可表現(xiàn)出來。
附錄C、轉(zhuǎn)基因作物檢測及安全性評價方法研究取得進(jìn)展
轉(zhuǎn)載自《中國科學(xué)院網(wǎng)站》（發(fā)布時間：2008-02-04）：
http://www.cas.cn/ky/kyjz/200802/t20080204_1028997.shtml
日前，由海洋生物技術(shù)研究與開發(fā)中心劉梅、王雷等承擔(dān)的青島市科技發(fā)展項(xiàng)目“轉(zhuǎn)基因作物檢測及安全性評價方法的研究”通過驗(yàn)收和成果鑒定。
該項(xiàng)研究建立了針對轉(zhuǎn)基因大豆及其深加工產(chǎn)品的巢式PCR檢測技術(shù)，利用該技術(shù)對32種水產(chǎn)飼料和43種食品進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因檢測；同時建立了針對轉(zhuǎn)基因大豆的LAMP檢測技術(shù)，簡便實(shí)用易于推廣。
該項(xiàng)目首次研究了轉(zhuǎn)基因大豆對羅非魚生理生化指標(biāo)的影響、轉(zhuǎn)基因大豆中外源基因在羅非魚各組織中的分布以及外源基因在養(yǎng)殖水體微生物間的漂流。
鑒定委員會一致認(rèn)為，該項(xiàng)目首次利用LAMP技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因大豆飼料并研究了轉(zhuǎn)基因飼料對羅非魚生理生化指標(biāo)的影響，研究成果總體達(dá)到國際先進(jìn)水平。
相關(guān)研究資料：
陳一文：中國真正共產(chǎn)黨人三代真誠的朋友
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d01017r5c.html
全國人民吃了十多年的金龍魚轉(zhuǎn)基因大豆油，竟然違規(guī)生產(chǎn)
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvyq.html
益海嘉里金龍魚化學(xué)浸出轉(zhuǎn)基因大豆油是“非法轉(zhuǎn)基因食品”
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvj3.html
國防部網(wǎng)站：讓生物戰(zhàn)爭走進(jìn)國防視野
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvy0.html
國防部網(wǎng)站：基因武器——威脅人類的“人種炸彈”
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvxy.html
《新金融觀察報》記者陳一昀：益海嘉里陷轉(zhuǎn)基因質(zhì)疑未了局
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dviy.html
人類家畜草甘膦中毒高死亡率揭穿農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因權(quán)威關(guān)注謊言
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvfo.html
孟山都公司是正人君子、唯利是圖，還是十惡不赦跨國公司?
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvcu.html
張孝德：農(nóng)業(yè)工業(yè)化失靈與中國特色農(nóng)業(yè)發(fā)展模式思考
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北京消費(fèi)者致益海嘉里就金龍魚轉(zhuǎn)基因大豆油第二封質(zhì)詢函
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dvbs.html
時代周刊：益海嘉里等利益集團(tuán)被指掩蓋轉(zhuǎn)基因慢性毒害
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dug1.html
上海社會科學(xué)院《社會觀察》：轉(zhuǎn)基因不能承受的政治之重
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102duft.html
支持北京消費(fèi)者就金龍魚轉(zhuǎn)基因大豆油質(zhì)詢益海嘉里
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102du88.html
益海嘉里各地機(jī)構(gòu)必須公布金龍魚轉(zhuǎn)基因豆油合法證明文件
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旅美中國學(xué)者曹明華：轉(zhuǎn)基因不是未來農(nóng)業(yè)發(fā)展的方向
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南方周末對張辰宇教授團(tuán)隊(duì)科學(xué)發(fā)現(xiàn)報道確認(rèn)轉(zhuǎn)基因危害
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金龍魚化學(xué)浸出轉(zhuǎn)基因大豆油涉嫌危險方法危害公共安全罪
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危害1：化學(xué)浸出轉(zhuǎn)基因大豆油含有溶劑殘留己烷是神經(jīng)毒素
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dr8f.html
危害2：抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆油草甘膦殘留量嚴(yán)重危害健康
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dr58.html
危害3：抗草甘膦轉(zhuǎn)基因大豆油成品油含轉(zhuǎn)基因片段危害健康
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dr57.html
危害4：轉(zhuǎn)基因大豆脂肪酸含量比非轉(zhuǎn)基因大豆的低不利健康
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dr56.html
危害5：轉(zhuǎn)基因大豆油的有益元素重金屬含量與非轉(zhuǎn)豆油不同
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dr55.html
危害6：轉(zhuǎn)基因大豆油多酚種類含量大不相同為非轉(zhuǎn)大豆3倍
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dr54.html
農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)口涉嫌以危險方法危害公共安全罪
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dt68.html
農(nóng)業(yè)部何以孟山都一家私利冒充中美貿(mào)易大局欺騙領(lǐng)導(dǎo)與人民
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dt0w.html
農(nóng)業(yè)部審批孟山都轉(zhuǎn)基因大豆進(jìn)口時為何瀆職不檢測草甘膦
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dswg.html
美國環(huán)保署對草甘膦生態(tài)人類健康風(fēng)險重新評估農(nóng)業(yè)部怎么辦
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dsux.html
農(nóng)業(yè)部必須公布孟山都轉(zhuǎn)基因大豆偽造安全文件重新接受審查
http://blog.sina.com.cn/s/blog_4bb17e9d0102dssg.html